Antibiograma

En la práctica médica los quimioterápicos y antibióticos se emplean para el tratamiento de las enfermedades infecciosas. Las bacterias se defienden desarrollando varios mecanismos que las llevan a resistir los antimicrobianos. En la mayoría de los casos, esta resistencia no es posible.

El Laboratorio de Microbiología ayuda al clínico haciéndole conocer la sensibilidad o resistencia de una determinada bacteria por medio del antibiograma.

El antibiograma puede realizarse por métodos de Dilución o de Disco difusión.

METODO DILUCIÓN:

Se prepara 10 tubos de prueba de Caldo nutritivo cada tubo se le agrega una cantidad de antibióticos diluidos en serie, desde 100 ug/ml hasta 0.39 ug/ml. el tubo 10 no contiene antibiótico y sirve como control de crecimiento. Se inocula cada tubo con una suspensión calibrada de microorganismos en estudio y se incuba a 37°C por 18 horas.

A partir de algún tubo empezará la inhibición del crecimiento, este punto de ruptura representa la MIC, definida como la concentración mínima de antibióticos en ug/ml que impide el crecimiento bacteriano in vitro.

METODO DE DIFUSIÓN: El método de prueba de susceptibilidad por difusión en discos incluye el agregado de una cantidad conocida de agente antimicrobiana un pequeño disco de papel absorbente que mide 6 mm de diámetro.

La colocación de este disco sobre una superficie de agar previamente sembrada con el microorganismo susceptible. La zona concéntrica de inhibición que resulta cuando el microorganismo a prueba se siembra sobre la superficie de la placa de agar antes de la aplicación del disco tiene relación lineal demostrada con la MIC para la mayoría de los antimicrobianos, medida por pruebas de susceptibilidad por dilución.

El método de disco-difusión en agar es una manera práctica fácil y rápida de realizar el antibiograma. El recomendado, el Bauer-Kirby, con el que se ha logrado uniformizar criterios que toman en cuenta los conceptos de concentración mínima inhibitoria (MIC) y de la concentración promedio en sangre de las drogas frecuentemente usadas.

MATERIALES:

• Placas Petri con Agar Muller Hinton.

• Torundas estériles.

• Discos impregnados con diferentes antibióticos.

• Pinzas estériles.

• Tubo de prueba con 3 ml de caldo tripticasa soya sembrando con cepa bacteriana, con una turbidez desarrollo comparable con el tubo N° 5 de la escala de Mc. Farland.

PROCEDIMIENTO:

• Sumergir la torunda en el tubo con caldo tripticasa soya con cepa bacteriana, escurrir en las paredes del tubo y extender uniformemente en la superficie de la placa de agar Muller-Hinton.

• Colocar con ayuda de pinzas los discos impregnados con diferentes antibióticos sobre la superficie del agar. Escoger los antibióticos de acuerdo al tipo de gérmenes y la localización de la infección.

• Los discos deben quedar a una distancia de 20 mm entre ellos.

• Incubar a 37 °C, durante 24 horas.

LECTURA E INTERPRETACIÓN:

• El diámetro de la zona de inhibición se mide con una regla milimetrada. colocada debajo de la Placa Petri.

• El límite del área de inhibición está dado por la inhibición completa del desarrollo tal como se puede apreciar a simple vista.

• Los milímetros de la lectura serán llevados a la tabla para traducir su interpretación a los términos y SUSCEPTIBLE, INTERMEDIO Y RESISTENTE.

ANTIBIÓTICOS QUE DEBEN SER CONSIDERADAS PARA PRUEBAS DE ANTIBIOGRAMA

ENTEROBACTERIACEAE	PSEUDOMONAS	ESTAFILOCOCOS	ENTEROCOCOS	ESTREPTOCOCOS
PRIMARIO AMIKACINA AMPICILINA CEFAZOLINA CEFALOTINA CLORANFENICOL GENTAMICINA TETRACICLINA TOBRAMICINA	AMIKACINA AZLOCILINA CARBENICILINA GENTAMICINA NETILMICINA TOBRAMICINA	CEFALOTINA CLINDAMICINA ERIROMICINA OXACILINA DICLOXACILINA PENICILINA G TETRACICLINA	PENICILINA G AMPICILINA VANCOMICINA	PENICILINA G
SECUNDARIO AMOXICILINA CEFTAZIDINA CEFTRIAXONA CARBENICILINA TMP - SMX	CEFTAZIDINA CEFTRIAXONA CEFOTAXINA CLORANFENICOL IMIPEM	AMIKACINA GENTAMICINA AMOXICILINA CLORANFENICOL TMP - SMX		CEFALOTINA CLORANFENICOL CLINDAMICINA ERITROMICINA TETRACICLINA

GUÍA PARA INTERPRETAR EL HALO DE INHIBICIÓN

ANTIBIÓTICO	CARGA DEL DISCO	RESIST.*	INTERM.*	SUSCEPT.*
AMPICILINA	10 ug	11 ó -	12-13	14 ó +
CEFACLOR	30 ug	14 ó -	15-17	18 ó +
CLORANFENICOL	30 ug	12 ó -	13-17	18 ó +
ERITROMICINA	15 ug	13 ó -	14-17	18 ó +
GENTAMICINA	10 ug	12 ó -	13-14	15 ó +
AC. NALIDIXICO	30 ug	13 ó -	14-18	19 ó +
TETRACICLINA	30 ug	14 ó -	15-18	19 ó +

* DIÁMETRO DEL HALO (mm)

PREGUNTAS DE EVALUACIÓN:

1. ¿Para qué es útil un Antibiograma?

2. Desde el punto de vista médico explique que importancia tiene el MIC y el MBC

3. Señale cinco ejemplos de antibióticos que sean: Aminoglucósidos, Betalactámicos, Quinolonas, indicando el nivel de acción con respecto a la estructura bacteriana.

4. ¿Cuándo decimos que un fármaco es sensible al desarrollo bacteriano?

5. ¿Cuál es el medio de cultivo más utilizado para realizar un antibiograma?