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El examen en fresco es uno de los procedimientos más simples para
observar cualquier microorganismo. Las coloraciones se utilizan para visualizar
la morfología. Las coloraciones simples son las que utilizan un solo colorante
(Azul de Metileno, Azul de Lactofeno, Violeta de Genciana).
Uno de los aspectos más notables de los microorganismos es su tamaño
pequeño. En las bacterias las dimensiones se calculan en unidades de micrómetro
(1um = 0.001mm). En cuanto a su forma hay tres tipos distintos; la forma
esférica ó cocos, alargada ó bacilos y las espiraladas ó espiroquetas. Cuando
los cocos se agrupan en pares se denominan diplococos, si es en cadena,
estreptococos y si es en racimos, estafilococos. Estas características
morfológicas proporcionan la base principal para su sistematización
morfológica.
En cuanto a los hongos pueden presentar la forma redondeada como las
levaduras o la forma filamentosa como los mohos. Los virus en cambio solo se visualizan
a través del microscopio electrónico por su tamaño menor de 300 nanómetros (1nm
= 0.000001mm).
La morfología de las bacterias se puede examinar de dos maneras:
1.
Observando los microorganismos vivos sin teñir.
2.
Observando los microorganismos muertos, teñidas con colorantes.
Las bacterias vivas son casi incoloras y no tienen suficiente
contraste con el agua en el cual están suspendidas. Tiñéndolas se les da
contraste en color con respecto al medio que los rodea, con lo cual son más
visibles.
La morfología bacteriana nos ayuda al diagnóstico, un examen apropiado
y cuidadoso de las bacterias nos proporciona una información adecuada
(caracterización de la especie).
Conociendo que el protoplasma bacteriano tiene el mismo índice de
refracción que el agua, es indispensable emplear procedimientos de tinción que
permita visualizarlas.
En esta práctica, empezamos recién a tener contacto con las bacterias,
se hace pues necesario utilizar colorantes a fin de hacerlas más visibles y que
permitan estudiar su morfología.
MATERIALES:
·
Tubo con suspensión bacteriana.
·
Tubo con suspensión de levaduras.
·
Láminas portaobjetos.
·
Láminas cubreobjetos.
·
Colorante Azul de Metileno.
·
Asa de platino, Aceite de Cedro, mechero, asa de siembra.
PROCEDIMIENTO:
a)
Con el asa, tome una pequeña porción de la suspensión bacteriana y
realice un frotis que no debe ser ni
muy grueso ni muy fino. Repita el procedimiento con la suspensión de levaduras.
b) Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama muy suavemente,
para obtener la fijación del frotis.
c)
Cubra, la preparación con dos o tres gotas de azul de metileno,
dejando que el colorante actúe por un minuto, luego lave la preparación con
agua corriente, evitando que el chorro de agua caiga directamente sobre el
frotis.
d)
Seque y observe al microscopio usando el lente de inmersión.
e)
Anotar en el protocolo.
PREGUNTAS DE EVALUACIÓN:
1.
¿Qué permite observar una coloración simple de un microorganismo?
2.
¿Qué se observa en el microorganismo al examen en fresco?
3.
¿Qué diferencias observa entre un coco y una levadura en la
observación microscópica?
