Medios de Cultivo

Son sustancias nutritivas líquidas o sólidas que se utilizan en el laboratorio para el crecimiento de los microorganismos. Sus componentes básicos deben satisfacer las mínimas exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano y varían según el tipo de la bacteria. Incluyen: agua, nutrientes como fuentes de nitrógeno, de carbono y energía. Se considera además para el crecimiento necesidades de O₂ (aerobios), CO₂ parcial o total (microaerófilos ó anaerobios) y condiciones óptimas de pH y temperaturas de incubación.

Los extractos de carne son los nutrientes básicos de muchos medios de cultivo, a los cuales suelen añadírseles carbohidratos y sales inorgánicas.

El agar, es el agente solidificante de un nutriente líquido, al igual que la gelatina. El agar se prepara a partir de una variedad de algas (Gelidium, Eucheuma. Pterocladia) en estado seco. Su principal componente es un polisacárido de cadena larga mayormente constituido por D-galactopiranosa.

CLASIFICACIÓN:

1)           Según su estado físico: Sólidos, líquidos y semisólidos.

2)           Según su composición y objetivos:

a)            Medios Comunes: Contienen los mínimos requerimientos para los microorganismos: Caldo Nutritivo, Caldo Peptonado, Caldo Triptosa, Agar Nutritivo, Agar Peptonado, Agar Almidón.

b)           Medios Enriquecidos: Contienen requerimientos de microorganismos más exigentes: Caldo Cerebro Corazón (BHI), Caldo Tripticasa Soya, Agar Cerebro Corazón, Agar Sangre, Agar Chocolate, Agar Müller Hinton.

c)            Medios Selectivos: Permiten solo el crecimiento de la especie que se desea aislar: Agar Me. Conkey, Agar Manitol Salado, Agar Salmonella- Shiguella (SS), Agar Sabouraud, Agar TCBS, Caldo Selenito, Medios Lowestein Jensen, Agar XLD, Agar Thioglicolato.

d)           Medios Diferenciales: Usados para visualizar cambios bioquímicos específicos Agar TSI, Agar LIA, Agar Citrato, Agar o Caldo Urea, Agar Sim

MATERIALES:

•              Probetas, balones de 250 ml

•              Potenciómetro, balanza

•              Frascos goteros de solución NaOH 10N

•              Frascos goteros de solución HCI10N

•              Frascos con agua destilada 250 mi

•              Tubos, placas petri y frascos estériles

•              Sangre de camero desfibrinada.

PROCEDIMIENTO:

CALDO NUTRITIVO          AGAR NUTRITIVO

Extracto de Carne	0.3 gr  Extracto de Carne	0.3 gr
Péptona	1.0 gr  Péptona	1.0 gr
Dextrosa	0.5 gr  Dextrosa	0.5 gr
Cloruro de Sodio	0.5 gr  Cloruro de Sodio	0.5 gr
Agua Destilada	100 ml Agua Destilada	100 ml
	Agar	1.5 gr

a)            Preparación de Agar Nutritivo:

•        Disolver los ingredientes respectivos, previamente pesados, en agua destilada someter a la acción del calor, cuidando de disolver primero el agar.

•        Ajustar el pH con el potenciómetro. Si la lectura es menor de 7.0 agregar gota a gota NaOH hasta llegar al pH deseado (7.0 a 7.4). Si la lectura es mayor de 7.4 agregar gota a gota HCI 10N hasta el pH deseado.

•        Envasar en frasco, autoclavarlo.

b)           Preparación de Agar Sangre:

•        Licuar en Baño María un frasco de 100 ml de Agar Nutritivo estéril.

•        Dejar enfriar hasta alcanzar una temperatura aproximadamente de 45°C es decir hasta que la T° sea soportada por el dorso de la mano.

•        Se agrega 5 ml de sangre citratada o desfibrinada de carnero con una pipeta estéril. Agitando por rotación suavemente con el fin de obtener una buena mezcla y evitar la formación de burbujas.

•        Repartir en placas Petri estériles cerca del mechero, dejar solidificar. Este medio es el Agar Sangre cuyo color normal debe ser rojo- cereza.

c)            Preparación de Agar Chocolate:

•        Proceder como en el caso anterior siguiendo los 3 primeros pasos.

•        Llevar el Agar sangre al Baño María hasta que el color rojo-cereza cambie al de chocolate, debido a la ruptura de los hematíes, con la consiguiente eliminación de la hemoglobina.

•        Repartir en placas Petri estériles, dejar solidificar.

•        Controlar la esterilidad en incubadora a 37°C por 24 hrs.

•        Mantener en la refrigeradora, tanto el Agar Sangre como el Agar Chocolate.

PREGUNTAS DE EVALUACIÓN:

1.            ¿Por qué se utiliza sangre de camero y no sangre humana en la preparación del Agar sangre?

2.            Señale los microorganismos que crecen en el Agar Mc Conkey.

3.            Señale la utilidad de los siguientes medios de cultivo de enriquecimiento: Caldo Selenito, Agua peptonada alcalina.

4.            Señale la utilidad y composición del Medio Ruiz – Castañeda.

5.            Señale la utilidad y algunos ejemplos de medios de transporte.