Baciloscopia

La Baciloscopia es el examen básico para el diagnóstico de la Tuberculosis y también el control de la evolución del tratamiento.

MATERIALES

• Frascos con muestra de esputo
• Set de colorante Ziehl Neelsen
• Bajalenguas
• Laminas portaobjetos
• Mechero

PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO

• Colocar sobre la mesa de trabajo una hoja doble de papel periódico o una bandeja metálica de 80x50 cm. Con papel periódico, humedecido con el fenol al 5%
• Colocar la muestra de esputo previamente rotulado sobre la mesa de trabajo, de la misma forma colocar las láminas portaobjetos sobre soporte de madera, en orden correlativo.
• Numerar las láminas portaobjetos con un lápiz graso trazando una línea en cada uno que divida su superficie en una tercera parte destinada a la numeración y dos terceras partes para hacer el extendido que hará en la cara inferior de la lámina para evitar que se borre al ejecutar la coloración
• Destapar cuidadosamente el envase de la muestra que se va procesar colocándola cerca del mechero.
• Dividir un aplicador de madera en dos o tres partes y tomar entre el pulgar y el índice de la mano, para luego seleccionar la partícula útil que es la porción mucopurulenta de color amarillo verdoso, enrollándola en el aplicador.
• Colocar la partícula útil sobre el portaobjeto y extender, haciendo movimientos de vaivén, hasta lograr que el extendido sea homogéneo (ni muy fino ni muy grueso), que no llegue a los bordes de la lámina a fin de que al manipular no se contamine el operador. Por ningún motivo debe calentarse la lámina mientras se haga el extendido, debido a que por el calor se forman círculos concéntricos y precipitados gránulos.
• Pasar por la llama del mechero los bordes de la lámina extendido, colocar sobre el soporte de madera y dejar secar a temperatura ambiente.
• Terminando el extendido, descartar los aplicadores en el receptáculo de incineración, cerrar envase y proseguir en igual forma las demás muestras.
• Fijar cada lamina, una vez seca mediante dos o tres pasajes rápidos sobre la llama del mechero con el extendido hacia arriba, colorear con Ziehl Neelsens.

PRIMER PASO: COLORACIÓN DE BACILOS

• Colocar sobre el soporte de coloración (alambre o varilla de vidrio) la serie, las láminas con el extendido hacia arriba, el número hacia el operador y con la varilla más próxima al operador, ligeramente más allá que la otra
• Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante fucsina básica fenicada, previamente filtrada.
• Calentar suavemente con la llama de hisopo de algodón humedecido en alcohol hasta la emisión de vapores repetir el proceso por tres veces, no debe hervir la preparación. Si el volumen de coloración disminuye por evaporación, debe agregarse más hasta cubrir totalmente el extendido, deja enfriar. El tiempo mínimo de coloración con fucsina es de 5 minutos.
• Eliminar la fucsina tomando la lámina por el extremo numerado, entre el pulgar y el índice de la mano o con una pinza, inclinándola hacia delante y dejando caer agua corriente a baja presión sobre la parte que no contenga el extendido.

SEGUNDO PASO: DECOLORACIÓN

• Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solución de alcohol ácido durante dos minutos hasta obtener una coloración clara o rosa pálido, de ser necesario decolorar nuevamente, efectuando movimientos en vaivén la lámina.
• Una vez eliminado el alcohol ácido lavar nuevamente la lámina con agua a baja presión, cuidando de no desprender la película.

TERCER PASO: COLORACIÓN DE FONDO

• Cubrir la superficie del extremo extendido con el colorante azul de metileno previamente filtrado, durante 30 segundos a un minuto.
• Eliminar el azul de metileno y lavar cada lamina con agua a baja presión, tanto la cara que tiene I extendido, como la cara interior.
• Colocar las láminas coloreadas en orden numérico sobre el soporte de madera y dejar secar al medio ambiente.
• Aclarar la numeración antes de su observación al microscopio.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

La observación microscópica, debe cumplir dos objetivos importantes.

1. Determinar si en el extendido hay Bacilo Ácido Alcohol Resistente (BAAR).

2. Establecer su número aproximado.

MÉTODO DE LECTURA

• Los bacilos aparecerán como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, teñidos de rojo, generalmente con gránulos mas coloreados en su interior, aislados, en parejas o en grupos sobre un fondo azul claro.
• Es aconsejable seguir una pauta uniforme de observación, leyendo de izquierda a derecha del extendido un mínimo de 100 campos útiles equivalentes a 5 minutos. Se considera campo microscópico útil aquel en el cual se observa elementos celulares de origen bronquial (leucocitos, fibras mucosas y células ciliadas). Los campos en que no aparezcan dichos elemento no deben contaminarse en la lectura.
• El observador irá tomando nota del número de bacilos observados y que el número de campos viajara según la cantidad de bacilos que contenga la muestra.
• Al término de la lectura retirar la lámina de la platina del microscopio, limpiar el aceite de inmersión con tolueno y guardar la lámina. Limpiar con papel lente humedecido con tolueno el exceso de aceite del objetivo de inmersión del microscopio.

INFORME DE RESULTADOS

( - ) : No se encuentra bacilos ácidos alcohol resistentes en 100 campos microscópicos observados.

( + ) : Menos de un BAAR por campo en 100 campos observados (de 10 - 99 BAAR)

(++) : Uno a 10 BAAR por campo, en 50 campos observados

(+++): Más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados.

BAAR: Bacilo ácido alcohol resistente.

Si en un extendido se encuentra de 1 a 9 bacilos en 100 campos observados, observar 100 campos más. Si persiste el resultado, realizar otro extendido de la misma muestra e informar lo contrario y solicitar nueva muestra.

PREGUNTAS DE EVALUACIÓN:

1. ¿Con la Baciloscopia, se puede diferenciar las diferentes especies de mycobacterias? ¿Por qué?

2. ¿Qué ventajas ofrece la Baciloscopia en el estudio y control de la tuberculosis?

3. ¿En que medios de cultivo se aísla el mycobacterium tuberculoso?

4. ¿Para qué se realiza las pruebas de resistencia antimicrobiana?

5. ¿Hacer un esquema de coloración y dibuje la observación de la lámina?